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    货号:Cat. No. T130985-10   Size: 10次(试用装)
    货号:Cat. No. T130985-100    Size: 100次
    —— 产品介绍
         本产品是可以直接用新鲜的动物、植物、细菌样品的裂解液进行PCR扩增的试剂盒。
    —— 产品特色
    1. 操作简单:免去DNA提取、蛋白去除、RNA去除等步骤,5分钟即得用于PCR的模板。
    2. 兼容性广:可以用于几乎所有的分子生物学样品,包括细菌、昆虫、真菌、各种植物、各种动物、法医样品(包括全血液、血痕、精斑、唾液、毛发、组织样品、口腔细胞和FTA卡)、石蜡组织切片等。
    3.  提供离心管专用研磨杵,便于处理棘手样品。
    4. 环保健康:不使用任何有毒有害的试剂。
    5.  尤其适用于大规模育种筛选和临床筛选。
    6.  本试剂盒可以处理100份不同的样品,足够100次PCR实验。
    —— 操作步骤
    1.  首次使用本产品时需要详细检查溶液A和溶液B是否有结晶析出。如果有需要37℃溶解后摇晃均匀待用。未用完部分可以放常温保存。
    2.  根据材料不同参考下表取少量样品到1.5 mL塑料离心管中。
     
    样品种类
    取用量
    动物组织
    1-5 mg
    鼠尾
    2mm长
    血液样品
    不超过20 uL
    植物叶片
    1-5 mg
    植物种子(去皮)
    1-5 mg
    酵母培养物
    0.2-0.5mL培养物沉淀
    细菌培养物
    0.2-0.5mL培养物沉淀
    注意:未列出样品,用户需要自己摸索最佳用量。对富含多醌多酚的植物材料(如棉花),组织使用量最好不要超过0.5mg。
    3.  加入100 uL溶液,确保溶液A完全将样品淹埋。
    4.  用研磨杵小心将样品在离心管内捣碎。血液一般捣碎30秒即可;实体组织需要捣碎到溶液的颜色变浑浊(植物叶片的话,溶液的颜色将变成绿色)。对棘手的样品,还可以增加95℃保温10-60分钟这一步骤,待温度冷却到室温后再进入下一步骤。残留的实体组织碎片不会影响后续试验。
    5.  加入100uL溶液B,震荡10秒混匀。
    6.  常温12000rpm离心2分钟。
    7.  将上清液转移到一个干净的1.5mL离心管中。如果不用,可以放-80℃长期保存。如果用于后续PCR,请直接进入下一步。
    8.  直接用裂解液作为模板设置30 uL体系的PCR反应体系如下:
     
    成分
    用量
    PCR MagicMix3.0
    15uL
    细胞裂解液(来自上一步)
    1-5uL
    自备PCR引物1(10uM)
    1uL
    自备PCR引物2(10uM)
    1uL
    补水到
    30uL
    注意:裂解液体积最好不要超过PCR体积的1/10。如果需要增加模板的加入量,则PCR体系应该相应的增加。如果加入5uL裂解液,则可以使用50uL的PCR体系。
    9.  放入PCR仪中进行PCR, PCR参数需要根据引物Tm值和靶分子长度等参数设置。一般不低于35次循环。
    10.  PCR结束后取5-10 uL直接上样电泳(本产品不需要上样液),红色染料电泳速度相当于50 bp DNA片段。
    注意:
    1.如果反应体系不是30 uL,各成分需要等按比例增加或减少。
    2.如果细胞裂解液中有不明PCR抑制物(植物、土壤和血液等DNA样品常含此类抑制物),可以在PCR体系中加入1/10的PCR抑制物清除剂,可能会对PCR有帮助。
    ——— 保存条件
         溶液A、溶液B和离心管专用研磨杵可以常温放置,PCR MagicMix 3.0需要低温运输、-20℃保存。有效期1年。
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